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外泌體攜帶的與疾病進(jìn)展緊密關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)志物可用于疾病進(jìn)展的監(jiān)視、檢測和診斷,是一種潛在的非侵入性生物標(biāo)志物。由于外泌體本身可以作為抗原提呈小泡,且有較長的循環(huán)半衰期,可用于免疫學(xué)相關(guān)研究,同時,源自ai細(xì)胞的外泌體可以被工程化,發(fā)揮免疫刺激作用,可作為中流疫苗應(yīng)用于ai癥的免疫zhiliao。此外,外泌體穩(wěn)定而廣fan地分布在qi官和組織中,具有低免疫原性、高耐受性等特點,且良好的膜滲透性可使其通過血腦屏障,因此可用作組織和qi官特異藥物輸送系統(tǒng),兼有高輸送效率和低副作用。因此,外泌體適合用作藥物載體遞送zhiliao劑(如阿霉素或姜黃素),zhiliao性miRNA、siRNA等核酸和蛋白質(zhì),運送至靶位點后實現(xiàn)靶向zhiliao。外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷,成熟于多囊泡胞內(nèi)體,終于膜融合。乳液提取試劑盒銷售
血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80°C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護(hù)劑,海藻糖可以提供生物保護(hù)作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細(xì)胞外囊泡的損失等。尿液外泌體提取試劑盒廠家外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來區(qū)分。
瘤在生長過程中會不斷地將外泌體釋放到周圍環(huán)境中去,同時,外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長時間,可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術(shù)的進(jìn)步,已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領(lǐng)域,外泌體中存在黑色素瘤標(biāo)志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關(guān)蛋白,且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者,通過檢測MIA和S100B表達(dá)水平對黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說,液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來源上的延伸,進(jìn)一步豐富了檢測手段,而隨著外泌體的不斷揭秘,相信其會在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來越重要的作用。
在20世紀(jì)80年代,外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細(xì)胞分泌的內(nèi)體來源的囊泡。人們對這些細(xì)胞外囊泡的興趣逐漸增加,因為它們似乎參與了很多細(xì)胞過程。外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNAs,介導(dǎo)體內(nèi)不同細(xì)胞類型之間的細(xì)胞間通訊,從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近,科學(xué)家才認(rèn)識到將外泌體與其他類型的細(xì)胞外囊泡分開的困難,這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域,該綜述著重于外泌體和其他分泌的細(xì)胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生,分泌及其后續(xù)的命運,因為它們的功能依賴于這些重要過程。各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運輸往哪一種細(xì)胞。
Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻(xiàn)中介紹,通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,10000xg離心1h,可將直徑在30-150nm之間,且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體,為了進(jìn)一步純化胎盤相關(guān)外泌體,將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,加入非線性蔗糖密度梯度層,10000xg超速離心5h,將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證,確定同時表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。在過去幾年中,有幾個實驗室報道了各種細(xì)胞類型的外泌體分泌,并討論了其潛在的生物學(xué)功能。植物提取試劑盒分類
外泌體大小不均的原因可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷,導(dǎo)致流體和固體的總含量不同。乳液提取試劑盒銷售
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量,但兩種方法也各有不足。動態(tài)光散射法中散射光強度依賴于顆粒質(zhì)量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測量結(jié)果,因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動態(tài)光散射法所得的結(jié)果強烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測時,為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息,需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準(zhǔn),操作繁瑣。受檢測靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進(jìn)行分析,難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。乳液提取試劑盒銷售
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